看完本篇你就知道什么是OCT冰凍切片包埋劑了
更新時間:2021-08-23 | 點擊率:5293
冷室、組織塊、包埋劑、切片刀之間的溫度平衡于優化的切片溫度(optimum cutting temperature, OCT)附近,是獲得高質量冰凍切片的保證。
不同的組織因構成和脂質各異而具有不同的OCT溫度。冰凍組織在接觸刀刃的瞬間,局部溫度短暫升高發生局部融化;隨后切開的組織薄片暴露于冷室被再次驟冷冰凍。
這種融化-冰凍溫度變化是切片皺褶或斷裂的內在原因,在此基礎上切片的軟硬度和厚薄度進一步影響皺褶產生。在切片過程中,冰凍包埋劑也須歷經與組織類似的溫度變化,這就要求包埋劑必須具有與組織塊相近的冰凍速度和軟硬韌度。
OCT冰凍切片包埋劑是一種聚乙二醇和聚乙烯醇的水溶性混合物,目前已廣泛用于免疫組化實驗室中,其用途是在冰凍切片時支撐組織,以增加組織的連續性,減少皺折及碎裂。又因OCT混合物為水溶性,故在漂片時可溶于水,所以在以后的染色中不會增加背景染色。
利用OCT混合物(opti-mum cutting temperature compound)預先浸潤組織,然后再進行恒冷箱切片,使切片質量得到改善。
OCT包埋劑(SAKURA產品,MADE IN USA)包埋流程:
1. 將放在蔗糖溶液中的組織塊取出,放入20g L-1 蔗糖與OCT包埋劑1:1體積比例混合液中,室溫浸泡2h
2. 移入OCT包埋劑中室溫浸泡4h,更換新的OCT包埋劑,室溫浸泡6h.
3. 將標本置于托物臺,用恒冷箱切片機切片(一般-22℃),片厚10μm,貼于預處理的載玻片上,-20℃冰箱保存。